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RNA寡核苷酸退火缓冲液是一种经过我们多次实验证实、可以用于RNA oligo退火的缓冲液。用于siRNA而合成的互补的RNA oligo可以用该退火缓冲液进行退火，以形成双链RNA。使用5×RNA寡核苷酸退火缓冲液可以有效避免RNA oligo自身形成发夹结构，有利于退火的正确进行。

使用本制品操作非常简单，只需把待退火的RNA oligo和5×RNA寡核苷酸退火缓冲液按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约60分钟即可完成。5×RNA寡核苷酸退火缓冲液经过特殊处理，不含RNase，可避免RNA的降解。

• 本制品只适合于RNA oligo的退火，不适合用于DNA oligo的退火。
  
• 由于RNA非常容易被降解，一定要严格遵守RNA的操作规范，防止RNase污染。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 把待退火的RNA oligo用DEPC水配制成200μM。溶解Annealing Buffer for RNA Oligos(5X)，混匀备用。
  
• 如下设置退火反应体系：
  

  成分	用量
  DEPC水	30μL
  5×RNA寡核苷酸退火缓冲液	20μL
  RNA oligo A(200μM)	25μL
  RNA oligo B(200μM)	25μL
  总体积	100μL

  
  按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。如果用的PCR仪没有热盖，在反应体系上加入一滴矿物油以防止蒸发。
  
• 如下设置PCR仪进行退火反应：
  

  步骤	温度	时间	说明
  1	90℃	1分钟	让oligo充分变性
  2	每5秒下降0.1℃，降至25℃	约60分钟	退火
  3	4℃	长时间保持	暂时存放

  
  
  • 每5秒下降0.1℃，降至25℃的程序设置，以Bio-Rad的T100为例为：1．90℃,2:00；2．90℃,0.05,-0.1℃ per cycle；3．GOTO step 2,650X；4．4℃,∞。
    
  • 如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每60秒下降1℃。程序设置以Bio-Rad的T100为例为：1．90℃,1:00；2．90℃,1:00,-1℃ per cycle；3．GOTO step 2,65X；4．4℃,∞。
    
  • 如果条件有限，也可以将水浴锅加热至90℃，把PCR管放在水浴锅中，或者把煮沸的热水加入到保温杯或保温瓶中，待水温降到90℃时放入PCR管。所用水量控制在1～2小时内自然降温至25℃左右。此方法的退火效果可能会比使用PCR仪略差一些。
• 退火结束后可以直接用于转染细胞，也可以-20℃冻存备用。